1. 用PBS液漂洗蓋玻片的原代細胞3次，每次30s；
2. 在室溫中用3%甲醛/PBS固定20min；
3. 用PBS液再漂洗3次，每次1min，后用濾紙吸干多余的PBS液；
4. 投入冷丙酮中（-10—-20℃）7min；
5. 用PBS漂洗3次，每次1min，后用濾紙吸干多余的PBS液；
6. 向直徑6cm的干凈碟皿*滴一滴濃度為0.1—0.2mg/ml的一級抗微管蛋白抗體，令小蓋片細胞面向下扣在抗體液上，覆以皿蓋，于37℃生化培養(yǎng)箱中放置45min—1h；
7. 向碟皿內(nèi)勻速緩慢滴加PBS，令蓋片浮起在液面，用鑷子夾出，按步驟3處理；
8. 向干凈碟皿*滴一滴濃度為0.1—0.2mg/ml的熒光標(biāo)記的二抗，其后操作按步驟6進行；
9. 按步驟7和3操作；
10. 滴pH8.5的90%的甘油/PBS少許于載玻片上，把小蓋片的原代細胞面覆在大蓋片上；
11. 將蓋片置于熒光顯微鏡下觀察；
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