現(xiàn)在市場(chǎng)上的抗體洗脫液和網(wǎng)上的洗脫液配方都是非常多的,那么選擇什么樣的洗脫液是有意義的呢?或者說(shuō)將洗脫液帶來(lái)的不穩(wěn)定性降到低,那這里我先給講講我的淺見吧。
洗膜有的是強(qiáng)酸性,有的不是強(qiáng)酸性的,那么那個(gè)才是只是洗脫抗體,不洗脫蛋白的呢?
有的同學(xué)擔(dān)心,在洗膜的同時(shí),我的蛋白也被洗掉了,本來(lái)豐度就非常低的蛋白,被這么強(qiáng)酸性液體洗滌30分鐘之后,膜上的檢測(cè)數(shù)據(jù)還準(zhǔn)嗎?
以上的擔(dān)心是對(duì)的,所以我的建議就是如果這個(gè)蛋白不好測(cè),那么請(qǐng)你在第1次就檢測(cè)這個(gè)蛋白,避免抗體洗脫液帶來(lái)的懷疑,如果兩個(gè)都是,那么hao建議你不要使用抗體洗脫液了,兩個(gè)都新做吧。這樣的hao了,但是如果樣品非常珍貴,沒有重復(fù),那么請(qǐng)你每次測(cè)完目的蛋白后都要檢測(cè)一次內(nèi)參,這樣做一個(gè)數(shù)據(jù)上的處理,基本就能解決問題了。
那么問題又來(lái)了,這篇文章講正確選擇,從上面的說(shuō)的都是跟這個(gè)無(wú)關(guān)呀,從上看什么樣的都行呀,沒有區(qū)別呀!
呵呵噠……區(qū)別還有的,上面的實(shí)驗(yàn)誤差就是我們的正確選擇,把實(shí)驗(yàn)誤差降低就是正確選擇,如果對(duì)抗體洗脫液不做選擇,有可能你的實(shí)驗(yàn)誤差是選擇人的幾倍或者幾十倍,誰(shuí)讓免疫印跡實(shí)驗(yàn)這么靈敏呢!所以在你需要用到stripping buffer的時(shí)候,建議你先敷兩次內(nèi)參抗體,看看前后的差距,如果數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì),前后的差距在5%之內(nèi),那么這個(gè)stripping buffer可以用了,如果超過5%,那么建議還是不要用的好(非用不可這個(gè)除外)。
所以大家明白了嗎?stripping buffer 不僅僅是帶來(lái)方便,同樣也帶來(lái)了不確定性,所以如何正確的選擇抗體洗脫液就成了你們需要考慮的問題。