蛋白G可與多數(shù)哺乳動(dòng)物IgG的Fc端特異性結(jié)合。使用的rec-Protein G是通過基因工程-重組蛋白的方法表達(dá)獲得。由于重組表達(dá)的rec-Protein G去除了除Fc端以外的其他非特異性結(jié)合位點(diǎn)，特異性更好。本產(chǎn)品采用“高配基、高濃度、小體積”的創(chuàng)新偶聯(lián)技術(shù)，將填料中有限的羥基(-OH)結(jié)合位點(diǎn)充分活化，使得單位體積中結(jié)合更多蛋白G，終純化效率較普通偶聯(lián)有30%的提高。蛋白G偶聯(lián)填料可直接用于血清、腹水中IgG抗體純化，或用于含F(xiàn)c片段的重組蛋白的純化。

l 產(chǎn)品技術(shù)指標(biāo)

    rec-Protein G/Sepharose 比值：2.7~3.2mg rec-Protein G/ml Sepharose

    rec-Protein G分子量：22.5KDa

每分子rec-Protein G可結(jié)合IgG位點(diǎn)數(shù)：2個(gè)

rec-Protein G可結(jié)合白蛋白位點(diǎn)數(shù)：無

    線性流速：300-500 cm/h

    耐壓指數(shù)：≤0.3 MPa（填料）

l 注意事項(xiàng)

請(qǐng)?jiān)趯?shí)驗(yàn)前仔細(xì)閱讀本rProtein G預(yù)裝柱使用說明。同時(shí)，將所要的所有試劑、耗材拿出置于室溫，恢復(fù)至室溫使用。

l 產(chǎn)品保存

產(chǎn)品儲(chǔ)存于2-8℃，保質(zhì)期兩年。

l rec-Protein G預(yù)裝柱純化IgG抗體步驟

以下實(shí)驗(yàn)方法適用于從血清或腹水中純化IgG抗體，不同來源的IgG與rec-Protein G的結(jié)合能力不同，具體情況請(qǐng)參考表1。

1. 將血清或腹水樣品（*上樣量2 mL樣品/mL柱）裝入截留分子量3.5 KDa透析帶中，于4 ℃冰箱中對(duì)1× PBS（pH 7.4）透析過夜；

2. 將rec-Protein G-Sepharose裝柱固定好，用10倍柱體積1× PBS（pH 7.4）平衡層析柱，建議流速為1 mL/min；

3. 將透析好的樣品從層析柱上端加入，建議流速為1 mL/min，為了獲得更好的抗體結(jié)合效果可將流穿液再上樣，重復(fù)2遍（或?qū)悠?次性加入層析柱后置于搖床上，輕輕搖動(dòng)，結(jié)合30 min）；

4. 樣品結(jié)合后，用20倍柱體積1× PBS(pH 7.4)洗滌層析柱，建議流速為1 mL/min，勿讓層析柱滴干；

5. 洗脫IgG，向?qū)游鲋隙思尤胂疵撘海?00 mM*，pH 2.7），用預(yù)先加有100 μL中和緩沖液（1M Tris，pH 9.0）的4 mL Ep管接收，2 mL /管，共收集10倍柱體積，進(jìn)行10 % SDS-PAGE電泳，確定IgG樣品所在管，回收樣品。

6. 用5倍柱體積再生緩沖液（100 mM*，pH 2.0）進(jìn)行再生處理，再加入10倍柱體積ddH2O清洗層析柱。后于層析柱中加入10倍柱體積, 20% Ethanol，4~8 ℃冰箱保存處理。

l 同類產(chǎn)品純化效果比較

  美國某的rProtein G Sepharose 4FF 親和層析柱對(duì)人血清進(jìn)行純化，其對(duì)人IgG的大結(jié)合量約為34 mg/mL Medium。

表1 rProtein G與不同來源Ig的反應(yīng)活性情況

表2  rProtein G預(yù)裝柱系列產(chǎn)品參數(shù)