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- 公司名稱 上海劍鈍生物科技有限公司
- 品牌
- 型號 JRD
- 所在地 上海市
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時間 2019/4/3 13:37:10
- 訪問次數(shù) 332
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銀染測驗是檢測聚丙烯酰胺凝膠中的蛋白質(zhì),是銀離子在堿性pH 環(huán)境下被還原成金屬銀,沉淀在蛋白質(zhì)的表面上顯色的原理。
銀染注意事項:
1. 銀染主要出現(xiàn)在膠的表面,用薄膠(0.5-0.75mm)可以提高靈敏度。
2. 對于考馬斯亮藍染色的膠,可用甲醇將膠漂洗后,繼續(xù)進行染色。乙酸會干擾染色,因此要確保將凝膠中的乙酸*洗凈。如果凝膠被過度銀染,可用Rapid Fix脫色,并用考馬斯亮藍二次染色。
3. 不同蛋白質(zhì)對該方法的反應是不一樣的,尤其是堿性蛋白染色效果差。因此,不宜用該方法測定不同蛋白的比例。
4. 染色過程中,緩慢的振蕩是必要的,一般選擇40-60 rpm.
5. 凝膠表面的裂紋多是由于壓力、手印及表面干燥所致,所以全程操作中都應帶手套。
6. 凝膠背景呈均一的黑色多是水中的雜質(zhì)引起的,所以溶液的配制應使用電導率小于1 μS的去離子水。
7. 如果染色后有呈灰塵或煙霧狀灰色或棕色的沉淀出現(xiàn)在凝膠表面,可能是在幾步漂洗過程中洗得不夠*,或是染色過程時溫度太低。
8. 較深的銀染背景多是丙烯酰胺中的雜質(zhì)所致。
9. 在zui初甲醇洗脫時就應該先除去甘油、尿素、*、Triton X-100和兩性電解質(zhì)這些干擾性物質(zhì)。
10. 室溫操作,溫度的波動往往會干擾染色的效果,恒溫水浴可以解決這個問題。
11. 當?shù)鞍踪|(zhì)中含有核酸或金屬時,染色則不會奏效。改變固定劑和染色之前對膠進行漂洗可以改進染色效果。
12. SDS凝膠中的巰基乙醇會導致在60 KDa或67 KDa處出現(xiàn)兩條水平線。減少巰基乙醇的用量即可避免。
13. 憑借戊二醛預處理可以使各種蛋白質(zhì)的染色提高40倍。
14. 染色使用的玻璃器皿必須非常干凈,用酸浸泡可以滿足要求。
15. 染色后應盡快照相,隨著時間延長,蛋白條帶會變淺,而背景會加深
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