EHA101農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞
EHA101 Chemically Competent Cell
產(chǎn)品編碼: 保存條件: -80℃
產(chǎn)品規(guī)格:
EHA101 | 20×100 μl |
pK7WGF2 (control vector) | 10 ng/μl 10 μl |
EHA101農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞基因型:
C58 (rif R) Ti pEHA101 (pTiBo542 D T-DNA) (kanR, strepR) Nopaline
EHA101農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞簡(jiǎn)要說(shuō)明:
EHA101菌株為C58型背景,核基因中含有篩選標(biāo)簽——*抗性基因rif,為了便于轉(zhuǎn)化操作,此菌株攜帶一無(wú)自身轉(zhuǎn)運(yùn)功能的胭脂堿型Ti質(zhì)粒pEHA101 (pTiBo542DT-DNA),此質(zhì)粒含有vir基因 (vir基因是T-DNA插入植物基因組必需的元件,pEHA101 (pTiBo542DT-DNA)質(zhì)粒自身的T-DNA轉(zhuǎn)移功能被破壞,但可以幫助轉(zhuǎn)入的雙元載體T-DNA順利轉(zhuǎn)移)。
pEHA101 (pTiBo542DT-DNA) 型Ti質(zhì)粒含有篩選標(biāo)簽:strep、kan,賦予EHA101菌株*抗性和*抗性,適用于玉米、水稻、煙草等植物的轉(zhuǎn)基因操作,經(jīng)pK7WGF2質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率可達(dá)104 cfu/μg DNA。
EHA101農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞操作說(shuō)明:
- 取-80℃保存的農(nóng)桿菌感受態(tài)于冰上待其部分融化,處于冰水混合狀態(tài)時(shí)插入冰中。
- 每100 μl 感受態(tài)加1 μg(體積不大于10 μl)質(zhì)粒DNA,用手管底混勻,依次于冰上靜置5分鐘、液氮5分鐘、28℃水浴5分鐘、冰浴5分鐘。
- 加入700 μl無(wú)抗生素的LB或YEB液體培養(yǎng)基,于28℃,200rpm振蕩培養(yǎng)2~3小時(shí)。
4. 6000 rpm離心一分鐘收菌,留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應(yīng)抗生素的LB或YEB平板上,倒置放于28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)2-3天。
EHA101農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞注意事項(xiàng):
- 加入質(zhì)粒時(shí)體積不應(yīng)大于感受態(tài)體積的1/10;質(zhì)粒不純或存在乙醇等有機(jī)物污染,轉(zhuǎn)化效率急劇下降;質(zhì)粒增大一倍,轉(zhuǎn)化效率下降一個(gè)數(shù)量級(jí)。
- 混入質(zhì)粒時(shí)應(yīng)輕柔操作,轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒可相應(yīng)減少終用于涂板的菌量。
- *濃度不應(yīng)高于25 μg/ml,過(guò)高的*濃度不利于農(nóng)桿菌生長(zhǎng),會(huì)降低其生長(zhǎng)速度和轉(zhuǎn)化效率。本公司感受態(tài)計(jì)算轉(zhuǎn)化效率時(shí)所用平板只含有50 μg/ml kan,若所用平板同時(shí)含有20 μg/ml rif則轉(zhuǎn)化效率降低到1/2。
4. 培養(yǎng)基中加入*的目的是防止雜菌生長(zhǎng)、篩選農(nóng)桿菌;根據(jù)所用菌株抗性加入*或*可防止Ti質(zhì)粒丟失,但*不利于農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)基因操作,所以一般培養(yǎng)農(nóng)桿菌時(shí)不考慮*或*,Ti質(zhì)粒丟失的概率極低 (可以忽略)。
其他*:
DH5α 感受態(tài)細(xì)胞
*0 感受態(tài)細(xì)胞
*0F´感受態(tài)細(xì)胞
Mach1 T1 感受態(tài)細(xì)胞
T1 感受態(tài)細(xì)胞
JM109 感受態(tài)細(xì)胞
JM110 感受態(tài)細(xì)胞
XL1 Blue 感受態(tài)細(xì)胞
XL2 Blue 感受態(tài)細(xì)胞
DB3.1 感受態(tài)細(xì)胞
Stbl2 感受態(tài)細(xì)胞
Stbl3 感受態(tài)細(xì)胞
XL10 Gold 感受態(tài)細(xì)胞
TG1 感受態(tài)細(xì)胞
HB101 感受態(tài)細(xì)胞
SURE 感受態(tài)細(xì)胞
DH10B 感受態(tài)細(xì)胞
DH10Bac 感受態(tài)細(xì)胞
BJ5183 感受態(tài)細(xì)胞
BJ5183 AD 1 感受態(tài)細(xì)胞
Stable 感受態(tài)細(xì)胞
Turbo 感受態(tài)細(xì)胞
F DH5α 感受態(tài)細(xì)胞
F *0 感受態(tài)細(xì)胞
DH5a 電轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞
*0 電轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞
SURE 電轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞
BJ5183 電轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞
BJ5183 AD 1 電轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞
DH10B 電轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞
XL1 Blue 電轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞
stable 電轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞
TG1 電轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞
EPI400 感受態(tài)細(xì)胞
EPI400 電轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞
BL21 感受態(tài)細(xì)胞
BL21 DE3 感受態(tài)細(xì)胞
BL21 DE3)pLysS 感受態(tài)細(xì)胞
BL21 AI 感受態(tài)細(xì)胞
BL21 Star DE3 感受態(tài)細(xì)胞
BL21 Star DE3)pLysS 感受態(tài)細(xì)胞
BL21 CodonPlus DE3) RIPL 感受態(tài)細(xì)胞
Rosetta DE3 感受態(tài)細(xì)胞
Rosetta gami DE3)pLysS 感受態(tài)細(xì)胞
Rosetta gami B DE3 感受態(tài)細(xì)胞
Rosetta gami 2 DE3 感受態(tài)細(xì)胞
OrigamiB DE3 感受態(tài)細(xì)胞
TB1 感受態(tài)細(xì)胞
OverExpress C43 DE3 感受態(tài)細(xì)胞
Tuner DE3 感受態(tài)細(xì)胞
ER2566 感受態(tài)細(xì)胞
F BL21 DE3 感受態(tài)細(xì)胞
GV3101 感受態(tài)細(xì)胞
EHA105 感受態(tài)細(xì)胞
AGL1 感受態(tài)細(xì)胞
LBA4404 感受態(tài)細(xì)胞
EHA101 感受態(tài)細(xì)胞
GV3101 電轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞
EHA105 電轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞
AGL1 電轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞
LBA4404 電轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞
EHA101 電轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞
Y1HGold 感受態(tài)細(xì)胞
Y2HGold 感受態(tài)細(xì)胞
AH109 感受態(tài)細(xì)胞
Y187 感受態(tài)細(xì)胞
EGY48 感受態(tài)細(xì)胞
NMY51 感受態(tài)細(xì)胞